Sterilisasi, Perhitungan & Pembuatan Media

Sterilisasi

Sterilisasi adalah suatu proses membebaskan suatu bahan atau benda dari semua bentuk kehidupan (mikroorganisme). Dalam mikrobiologi sterilisasi merupakan tahap yang sangat penting, karena dalam tahap sterilisasi semua alat dan media yang kita gunakan untuk proses inokulasi, pembiakan, atau penanaman mikroba dalam keadaan steril dan tidak terkontaminasi oleh mikroba lain yang ada dilingkungan sekitar.

Jenis sterilisasi:

1. Sterilisasi Mekanik: Misalnya menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (Filtrasi)
2. Sterilisasi Fisik : Misalnya melalui Pemanasan (pemijaran dengan bunsen, uap air bertekanan-autoclaf) dan penyinaran UV. Misalnya bunsen, autoklaf, uap air.
3. Sterilisasi Kimiawi : Misalnya senyawa desinfektan. Misalnya alkohol 70%

Langkah-langkah sterilisasi menggunakan autoklaf diantaranya:

1. Menyiapakan alat dan bahan yang akan disterilisasi
2. Membungkus alat yang akan disterilisasi dengan kertas sampul coklat
3. Untuk alat-alat seperti jarum ose, spuit, dan kapas lidi, langsung dibungkus menggunakan kertas sampul dan melipat sedikit bagian atas dan bawah kemudian distaples serta diberi tanda bagian yang akan disobek nantinya.
4. Untuk cawan petri, langkah pertama adalah menyiapkan ketas sampul. Meletakkan cawan petri pas dibagian tengah dengan posisi penutup ada dibawah. Menarik bagian ujung masing-masing kertas dan melipat ketengah. Bagian ujung yang satu ditarik ke tengah dan bagaian yang satunya juga dilipat ketengah. Menarik kedua bagian yang sudah terlipat kebelakang. Lakuakan hal sama pada bagian yang satu lagi.
5. Untuk tabung reaksi hanya menutup bagian ujung dengan alumunium foil dan karet.
6. Untuk erlenmeyer biasanya berisi media yang akan disterilisasi, cukup hanya dengan menutup ujung erlenmeyer dengan kapas dan membungkus dengan alumunium foil dan karet.
7. Memasukkan semua alat dan media kedalam autoklaf.

Media Mikrobiologi

Media adalah Suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media terbagi menjadi 2 ada media hidup dan ada media mati. Media hidup misalnya manusia, telur berembrio, biakan jaringan dll. Sedangkan media mati berdasarkan konsistensinya ada media padat, setengah padat, cair. Berdasarkan komposisi ada media sintetis, semi sintetis, non sintetis. Berdasarkan sifat fisiologis dan biologis ada persemaian, selektif dan eksklusif.

Media agar biasanya dibuat dengan menggunakan cawan petri dan tabung reaksi. Media yang dibuat di cawan petri dikenal dengan media agar lempeng dan media yang dibuat pada tabung reaksi dikenal dengan media agar miring.

• Daftar Nama Media Sintetis beserta kegunaannya

Nama Media Sintetis	Kegunaan
Nutrient Agar (NA)	Mengandung sumber nitrogen digunakan untuk budidaya bakteri dan penghitungan organisme dalam air, limbah, kotoran dan bahan lainnya.
Saboraud Dextrose Agar (SDA)	Sebagai sumber energi untuk pertumbuhan mikroorganisme, jamur & kuman tertentu
Eosin Methylene Blue (EMB)	Untuk mengetahui ada atau tidaknya bakteri coliform di dalam suatu sample. Mengandung laktosa dan berfungsi untuk membedakan mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. aureus, P. aerugenosa, dan Salmonella.
Potato Dextrose Agar (PDA)	Untuk mengembangbiakkan dan menumbuhkan jamur dan khamir. Komposisi Potato Dextrose Agar ini terdiri dari bubuk kentang, dextrose dan juga agar.
Salmonella Shigella Agar (SSA)	Media selektif untuk mengisolasi kuman Salmonella sp dan Shigella sp dari sampel feses,urin, dan makanan.

• Rumus Pembuatan Media
• 
•   

 

• Standart Pengenceran Media

1. NA : 20 g /1000 ml
2. SDA : 65 g / 1000 ml
3. PDA : 39 g / 1000 ml
4. SSA : 60 g / 1000 ml
5. EMB : 36 g / 1000 ml

• Takaran Standart Volume

1. Cawan petri 15 ml
2. Tabung reaksi 5 – 10 ml

• Penuangan Media

1. Menyiapkan LAF
2. Menyalakan Bunsen
3. Menyiapkan alat dan media yang sudah disterilisasi
4. Untuk cawan petri memanaskan dlu tepi cawan dengan bunsen kemudian membuka sedikit tutup cawan kemudian menuangkan media kurang lebih 15 ml
5. Untuk tabung reaksi membuka alumunium foil, memanaskan ujung tabung reaksi dengan bunsen kemudian menungkan media kurang lebih 5 ml. Meletakkan dengan posisi ujung tabung reaksi lebih tinggi.
6. Untuk media cair dan semisolid hanya melakukan penuangakan pada tabung reaksi saja.

Media Alternatif

Media alternatif adalah media campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang terbuat dari bahan alami dan diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Contoh perhitungan media alternatif

• Pembuatan Media Taoge

1. Taoge : 100 gr
2. Sukrosa : 60 gr
3. Agar : 15 gr
4. Aquades : 1000 ml

Perhitungan:

1. Taoge : (2 x 15 ml) + (2 x 5) x 100 gr           = 30 + 10 x 100 = 4 gr

1000ml                                   1000

1. Sukrosa : (2 x 15 ml) + (2 x 5)  x 60 gr            = 30 + 10 x 60 = 2,4 gr

1000ml                                   1000

1. Agar : (2 x 15 ml) + (2 x 5) x 15gr              = 30 + 10 x 15 = 0,6 gr

1000ml                                    1000

1. Aquades : (2 x 15 ml) + (2 x 5) x 1000             = 30 + 10 x 1000 = 40 ml

1000ml                                   1000

• Standart Media Alternatif

Taoge :

1. Taoge : 100 gr
2. Sukrosa : 60 gr
3. Agar : 15 gr
4. Aquades : 1000 ml

Wortel :

1. Wortel : 200 gr
2. CaSO4 : 2 gr
3. Agar : 4 gr
4. Aquades : 1000 ml

Kentang

1. Kentang : 200 gr
2. Glukosa : 20 gr
3. Agar : 15 gr
4. Aquades : 1000 ml

Materi mikrobiologi ini diambil dari Materi Praktikum Mikrobiologi Umum di Laboratorium Biologi Universitas Muhammadiyah Malang, yang telah disusun oleh Nindi Nazula Fajarini (Askor Mikrobiologi 2014), Endrik Nurrohman (Askor Mikrobiologi 2013), Qorry Aulya Rohmana (Askor Mikrobiologi 2012), Amalia Rakhman dan Faiqotul Himmah (Askor Mikrobiologi 2011) dan anggota TIM Mikrobiologi lainnya. Semoga bermanfaat.